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Pré-cuisez votre agar et réchauffez-le au micro-ondes

  • timer  5 Minutes à lire
  • 12 janvier 2022
  • Écrit par Michèle Heidemeyer
  • Life Science

Il y a un micro-ondes dans presque tous les laboratoires de biologie moléculaire – alors utilisons-le pour autre chose que quelques gels d'agarose !

Préparation des plaques de gélose

 

Au moment où le travail est sur le point de se terminer au laboratoire, avant de rentrer chez vous, vous voulez rapidement déposer quelques cellules Top-10 transformées. Pas de chance ! Car toutes les plaques d'agar ont été utilisées et, comme toujours, aucun de vos aimables collègues de laboratoire n'a pensé à préparer de nouvelles plaques d'agar. Vous devez donc consacrer de précieuses heures supplémentaires à l'autoclavage.

Pour que vous n'ayez pas à répéter constamment cette tâche ennuyeuse, nous avons élaboré quelques recettes pour précuire et ensuite réchauffer des plaques de gélose prêtes à être utilisées de façon impromptue.


Recette pour une réserve d'urgence de 200 ml d'agar :

Pré-cuisson de la gélose :

  • Tout d'abord, la gélose est pesée dans une bouteille de 1 L (nous avons listé trois des recettes les plus fréquemment utilisées).

 

Pour 1 L de milieu

Milieu LB

10 g de Tryptone, 5 g d'extrait de levure, 5 g de NaCl pH 7.0

Milieu SOB

20 g de Tryptone, 5 g d'extrait de levure, 0,5 g de NaCl pH 7.5

Milieu TYE

10 g de Tryptone, 5 g d'extrait de levure, 8 g de NaCl

  • La poudre pesée est ensuite mise en suspension dans 1 L d'eau distillée. Le milieu doit être bien mélangé, et si nécessaire, il peut être brièvement chauffé (sur une plaque chauffante) tout en remuant fréquemment.
  • Lorsque toute la poudre est complètement dissoute, aliquotez 200 ml du mélange dans une bouteille Duran de 250 ml (utilisez un cylindre de mesure pour cela).
  • Remplissez maintenant 4 bouteilles avec 200 ml de milieu dans chacune. Les derniers 200 ml ne sont jamais utilisés (des résidus dans le flacon d'origine empêcheraient un remplissage exact de 200 ml).
  • Pour la stérilisation dans l'autoclave, le couvercle ne doit être que légèrement vissé sur le filetage de la bouteille !
  • Les milieux gélosés sont maintenant autoclavés à 121°C pendant 20 minutes.
  • Après l'autoclavage, les flacons en verre de laboratoire doivent être fermés hermétiquement (pour éviter toute contamination).
  • L'agar précuit peut être conservé sans problème pendant une longue période à température ambiante.

Réchauffement au micro-ondes :

Lorsque vous avez besoin de plaques d'agar rapidement, il est facile de prendre une de ces bouteilles de 100 ml précuites et de les faire bouillir au micro-ondes.

Au micro-ondes avec l'agar
  • Pour cela, mettez votre flacon dans le micro-ondes avec le couvercle desserré (!) - comme pour l'autoclavage - pendant deux minutes à pleine puissance.
  • Dès qu'une mousse commence à se former, sortez brièvement le milieu du micro-ondes et faites tourner le flacon pour dissoudre la mousse.
  • Continuez ensuite à chauffer l'agar au micro-ondes jusqu'à ce qu'il soit complètement liquide. L'agar doit bouillir brièvement au moins deux ou trois fois.
  • Par précaution, ne touchez le flacon qu'avec des gants de cuisine, sinon vous vous exposez fortement à un risque de brûlure !
  • Dès que la gélose est liquide, commencez à la refroidir soigneusement jusqu'à 55 à 65°C en la faisant tourner dans un bain d'eau froide.
  • Remuez maintenant tout en ajoutant l'antibiotique requis.
  • Vous pouvez alors le verser sur vos plaques.


Conseil : Disposez les plaques pour les faire sécher individuellement au lieu de les empiler (ce qui est souvent la pratique courante), car cela fait sécher la gélose beaucoup plus rapidement !

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