Anwendungen:
- RT-PCR in einem Schritt
- RT-PCR von komplexen GC/AT-reichen Templates
- Schnelle RT-PCR
Vorteile:
- Enthält sowohl RT Mix als auch RT-PCR Mastermix für RT und PCR in einem Röhrchen.
- RT Mix enthält RNase Inhibitor und thermostabilen RT (bis 55°C).
- RT PCR Mastermix ermöglicht die Erkennung von Targets mit geringer Kopienanzahl.
Der highQu 1Step RT PCR Kit kombiniert den 20X RT und RNase Inhibitor Mix für eine effiziente Reverse Transkription und den 2X PCR Mastermix für die anschließende Amplifikation von cDNA im selben Probengefäß.
RT2 Mix, 20X ist eine Mischung aus dem entwickelten MMuLV (stabil bei 40-55°C, was eine hohe Ausbeute an langen Transkripten ermöglicht) und einem effizienten Ribonuclease Inhibitor, der die Template-RNA vor RNasen schützt.
Die resultierende cDNA wird dann durch den 1Step RT PCR Mastermix, 2X amplifiziert. Der PCR-Mastermix enthält eine patentierte Hot Start Taq DNA Polymerase. Die Enzymaktivität bei Raumtemperatur wird durch einen kleinmolekularen Inhibitor blockiert. Erst nach dem Erhitzen wird das Enzym aktiv, was eine hochspezifische und extrem empfindliche Amplifikation, keine Primer-Dimerbildung und keinen Hintergrund ermöglicht. In Kombination mit dem optimierten Puffer bietet das Enzym höhere Erfolgsraten in anspruchsvollen PCR-Anwendungen wie der Amplifikation komplexer oder längerer DNA-Templates und dem schnellen Cyclen.
Hot Start Taq DNA Polymerase hat die gleiche PCR-Genauigkeit wie Taq DNA Polymerase, 4,5 x 104 (Nukleotide, die vor dem Fehler eingebaut werden), und produziert A-tailed Produkte, die für die Ligation in TA-Klonierungsvektoren geeignet sind.